Введение

Доклинические исследования безопасности являются фундаментальным этапом разработки любого лекарственного препарата, предшествующим его клиническому изучению с участием человека. Целью данного этапа является получение научно обоснованных данных о безопасности вещества, выявление потенциальных токсических эффектов, определение органов-мишеней и установление соотношения «польза–риск». В рамках Евразийского экономического союза (ЕАЭС) требования к доклиническим исследованиям гармонизированы и закреплены в единых нормативных правовых актах, что обеспечивает взаимное признание результатов экспертизы между государствами-членами Союза.

Понимание регуляторных требований к доклинической разработке критически важно для заявителей, так как недостатки на этом этапе могут привести к отказу в разрешении на проведение клинических исследований или отказе в регистрации препарата. Настоящая статья представляет собой подробный обзор требований ЕАЭС к доклиническим исследованиям безопасности, основанный на актуальных решениях и рекомендациях Евразийской экономической комиссии (ЕЭК). Для понимания терминологии и общей иерархии нормативных документов рекомендуется ознакомиться со статьей Терминология и нормативная база ЕАЭС в сфере обращения лекарственных средств.

Доклинические исследования неразрывно связаны с последующими этапами жизненного цикла препарата. Данные, полученные на этом этапе, ложатся в основу дизайна клинических исследований, описанных в статье Клинические исследования и биоэквивалентность в ЕАЭС, и влияют на формирование раздела качества регистрационного досье, рассмотренного в статье Требования к качеству лекарственного препарата и нормативный документ по качеству. Кроме того, организация исследований должна соответствовать принципам надлежащей лабораторной практики (GLP), что перекликается с требованиями к производству, изложенными в статье Надлежащая производственная практика (GMP) и инспекции в ЕАЭС.

Нормативная иерархия и обязательность требований

В системе регулирования ЕАЭС существует четкое разделение документов на обязательные и рекомендательные. Это различие имеет принципиальное значение при планировании программы доклинических исследований.

Обязательные требования устанавливаются Решениями Совета ЕЭК и Решениями Коллегии ЕЭК. Несоблюдение этих требований является основанием для отказа в регистрации или приостановления клинических исследований. Ключевым обязательным документом является Решение Коллегии ЕЭК от 26.11.2019 № 202 «Об утверждении Руководства по доклиническим исследованиям безопасности в целях проведения клинических исследований и регистрации лекарственных препаратов». Именно этот документ определяет виды необходимых исследований, их продолжительность и сроки проведения относительно клинических фаз.

Также обязательным является Решение Совета ЕЭК от 03.11.2016 № 81 «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств». Согласно этому решению, доклинические исследования безопасности должны проводиться в соответствии с принципами GLP для обеспечения достоверности и воспроизводимости данных.

Рекомендательные требования содержатся в Рекомендациях Коллегии ЕЭК. Они разъясняют методы реализации обязательных требований и предлагают оптимальные подходы. Отклонение от рекомендаций допускается при наличии научного обоснования, обеспечивающего эквивалентный уровень безопасности. К основным рекомендациям относятся:

• Рекомендация Коллегии ЕЭК от 21.05.2020 № 10 «О Руководстве по проведению доклинических исследований токсичности при повторном (многократном) введении».
• Рекомендация Коллегии ЕЭК от 27.10.2020 № 18 «О руководстве по исследованию фармакологической безопасности».
• Рекомендация Коллегии ЕЭК от 22.12.2020 № 33 «О Руководстве по изучению токсикокинетики и оценке системного воздействия».
• Рекомендация Коллегии ЕЭК от 06.08.2019 № 23 «О Руководстве по оценке и контролю ДНК-реактивных (мутагенных) примесей».
• Рекомендация Коллегии ЕЭК от 02.09.2019 № 25 «О Руководстве по доклинической и клинической разработке комбинированных лекарственных препаратов».

Важно отметить, что хотя рекомендации формально не являются обязательными, эксперты уполномоченных органов ожидают их соблюдения. В случае использования альтернативных подходов заявитель должен предоставить подробное обоснование в Модуле 2 регистрационного досье, как указано в статье Подготовка регистрационного досье по правилам ЕАЭС.

Виды доклинических исследований безопасности

Согласно Руководству, утвержденному Решением Коллегии ЕЭК от 26.11.2019 № 202, доклиническая оценка безопасности включает комплекс исследований, направленных на выявление различных видов токсичности.

1. Фармакологические исследования

Фармакологические исследования подразделяются на первичную фармакодинамику, вторичную фармакодинамику и фармакологическую безопасность.

• Первичная фармакодинамика изучает механизм действия вещества на целевую терапевтическую мишень. Эти исследования не требуют соблюдения GLP, но их результаты используются для обоснования выбора дозы.
• Вторичная фармакодинамика изучает эффекты, не связанные с целевой мишенью.
• Исследования фармакологической безопасности направлены на выявление нежелательных эффектов на жизненно важные функции организма.

Согласно Рекомендации Коллегии ЕЭК от 27.10.2020 № 18, основная батарея исследований фармакологической безопасности должна включать оценку воздействия на центральную нервную, сердечно-сосудистую и дыхательную системы. Эти исследования должны быть завершены до первого введения препарата человеку. В случаях, когда свойства вещества хорошо изучены или системная экспозиция низкая (например, для препаратов местного применения), объем исследований может быть сокращен при надлежащем обосновании.

2. Исследования общетоксических свойств

Исследования токсичности являются ядром доклинической программы. Они подразделяются на исследования однократного и повторного введения.

Исследования однократной токсичности традиционно проводились для определения летальной дозы, однако современные подходы, отраженные в Руководстве (Решение № 202), смещают акцент на определение максимально переносимой дозы (MTD) и выявление признаков токсичности без обязательного достижения летальности. Данные этих исследований используются для прогнозирования последствий передозировки у человека.

Исследования токсичности при повторном введении являются наиболее значимыми для обоснования клинических исследований. Их продолжительность должна коррелировать с длительностью планируемого клинического применения. Согласно Рекомендации Коллегии ЕЭК от 21.05.2020 № 10, исследования должны проводиться на двух видах млекопитающих (одни из которых негрызуны), если не обосновано использование одного вида. Выбор вида животных должен базироваться на сходстве фармакокинетического профиля с человеком.

Требования к выбору максимальных доз регламентированы Решением № 202. Предельные дозы, равные 1000 мг/кг/сут для грызунов и негрызунов, признаются приемлемыми, если они обеспечивают достаточное превышение клинической экспозиции (как правило, 50-кратное для обоснования III фазы). Если доза 1000 мг/кг не обеспечивает необходимого превышения экспозиции, допускается использование максимальной достижимой дозы (MFD).

3. Исследования генотоксичности

Целью исследований генотоксичности является выявление способности вещества вызывать повреждение генетического материала. Стандартная батарея исследований включает:

1. Тест на генные мутации у бактерий (тест Эймса).
2. Оценка хромосомных повреждений у млекопитающих (in vitro или in vivo).

Согласно Решению № 202, проведение доклинических исследований на генные мутации достаточно для обоснования всех клинических исследований с однократным введением. Для обоснования исследований с повторным введением необходима дополнительная оценка хромосомных повреждений. Полный набор исследований генотоксичности должен быть завершен до начала II фазы клинических исследований. Положительные результаты требуют дальнейшей оценки риска и, возможно, проведения дополнительных исследований in vivo.

4. Исследования канцерогенности

Исследования канцерогенности требуются для лекарственных препаратов, предназначенных для длительного применения, или при наличии особых опасений (например, положительная генотоксичность, структура, вызывающая опасения). Условия проведения таких исследований установлены в Рекомендации Коллегии ЕЭК от 06.08.2019 № 23.

Для препаратов, предназначенных для лечения тяжелых заболеваний у взрослых или детей, исследования канцерогенности допускается проводить после регистрации препарата. Однако если имеются опасения относительно возможного канцерогенного риска, результаты должны быть представлены до проведения клинических исследований. Важно отметить, что большая продолжительность клинического исследования сама по себе не рассматривается как существенная причина возможного канцерогенного риска без наличия других факторов.

5. Исследования репродуктивной и онтогенетической токсичности

Эти исследования оценивают влияние препарата на фертильность, эмбриофетальное развитие и постнатальное развитие потомства. Требования к срокам проведения зависят от популяции пациентов, включаемой в клинические исследования.

• Мужчины: Включение мужчин в клинические исследования I и II фаз допускается до проведения специальных исследований фертильности, если оценка репродуктивной системы самцов проводилась в рамках исследований токсичности с повторным введением (не менее 2 недель).
• Женщины без детородного потенциала: Включение допускается без исследований репродуктивной токсичности при наличии оценки репродуктивных органов в исследованиях токсичности с повторным введением.
• Женщины с детородным потенциалом: Включение в ранние фазы возможно при условии интенсивного контроля риска (контрацепция, тесты на беременность) и наличия предварительных данных об эмбриофетальном развитии. Полные исследования репродуктивной токсичности должны быть завершены до включения женщин в крупные или продолжительные исследования (III фаза).
• Дети: До начала исследований с участием детей должны быть получены данные по безопасности у взрослых, исследования токсичности при повторном введении, основная батарея фармакологической безопасности и стандартный набор исследований генотоксичности. Токсикологические исследования на неполовозрелых животных проводятся, если имеющихся данных недостаточно для обоснования безопасности у детей.

Токсикокинетика и оценка системного воздействия

Токсикокинетика (ТК) является связующим звеном между доклиническими токсикологическими исследованиями и клинической безопасностью. Основная цель ТК — описание системной экспозиции вещества у животных, используемых в токсикологических исследованиях.

Согласно Рекомендации Коллегии ЕЭК от 22.12.2020 № 33, токсикокинетические исследования проводятся, как правило, в рамках токсикологических исследований (сопутствующие ТК исследования). Это позволяет избежать дублирования и сокращения количества животных.

Ключевые аспекты токсикокинетики:

1. Количественное определение экспозиции: Экспозиция выражается через фармакокинетические параметры, такие как площадь под кривой «концентрация–время» (AUC) и максимальная концентрация (Cmax). Эти данные позволяют оценить нагрузку на организм животного и сравнить ее с ожидаемой экспозицией у человека.
2. Обоснование доз: ТК данные помогают установить, достигаются ли при выбранных дозах уровни системных концентраций, необходимые для выявления токсичности. Если абсорбция соединения ограничивает экспозицию, в качестве высшей дозы принимается доза, обеспечивающая максимальную экспозицию.
3. Метаболиты: Измерение концентрации метаболитов важно, если они образуются у человека в значительных количествах (>10% от суммарной экспозиции) и не выявляются у животных в сопоставимых уровнях. Это необходимо для подтверждения достаточности токсикологической оценки метаболитов.
4. Нелинейная кинетика: При наличии нелинейной кинетики (насыщение клиренса, аутоиндукция ферментов) требуется особое внимание к оценке экспозиции на разных этапах исследования, так как токсичность может неожиданно возрастать или снижаться.

Токсикокинетические данные должны быть представлены в отчете об исследовании вместе с оценкой результатов и последствий для интерпретации токсикологических данных. Аналитические методы, используемые для ТК, должны быть валидированы в соответствии с требованиями, изложенными в статье Валидация аналитических методик и производственных процессов.

Оценка и контроль мутагенных примесей

Оценка мутагенных примесей является критическим аспектом обеспечения качества и безопасности, особенно в контексте потенциального канцерогенного риска. Рекомендация Коллегии ЕЭК от 06.08.2019 № 23 устанавливает единые подходы к идентификации, категоризации и контролю ДНК-реактивных примесей.

Классификация примесей:
Примеси классифицируются на 5 классов в зависимости от их мутагенного и канцерогенного потенциала:

• Класс 1: Известные мутагенные канцерогены. Контроль на уровне специфичного допустимого предела.
• Класс 2: Известные мутагены с неизвестным канцерогенным риском. Контроль на уровне порога токсикологической угрозы (TTC).
• Класс 3: Структурный признак, не связанный со структурой фармацевтической субстанции, отсутствие данных по мутагенности. Контроль на уровне TTC или проведение теста на мутагенность.
• Класс 4: Структурный признак, тот же признак у фармацевтической субстанции, которая оказалась немутагенной. Рассматривается как немутагенная.
• Класс 5: Отсутствие структурных признаков или данные, подтверждающие отсутствие мутагенности. Рассматривается как немутагенная.

Порог токсикологической угрозы (TTC):
По умолчанию допустимое поступление мутагенной примеси составляет 1,5 мкг/сут при пожизненной экспозиции (риск 1 случай на 100 000). Для менее чем пожизненной экспозиции допустимое поступление может быть увеличено согласно таблице продолжительности терапии. Например, при терапии до 1 месяца допустимое поступление может составлять 120 мкг/сут.

Контроль примесей:
Стратегия контроля может включать испытания в спецификации фармацевтической субстанции, контроль сырья или промежуточных продуктов, либо контроль процесса производства. Для обоснования отсутствия контроля в спецификации готового продукта (Вариант 4) необходимо доказать, что процесс производства эффективно удаляет примесь или превращает ее в нетоксичное соединение.

Оценка мутагенного потенциала не проводится для биологических, пептидных, олигонуклеотидных препаратов, радиофармацевтических средств и лекарственного растительного сырья. Также руководство не распространяется на препараты для лечения распространенного рака, где риск может быть оправдан соотношением пользы и риска.

Доклиническая разработка комбинированных препаратов

Разработка комбинированных лекарственных препаратов (фиксированных комбинаций) имеет свои особенности, регламентированные Рекомендацией Коллегии ЕЭК от 02.09.2019 № 25 с учетом изменений, внесенных Решением Коллегии ЕЭК от 11.10.2022 № 143.

Объем доклинических исследований зависит от опыта применения отдельных компонентов комбинации:

1. Зарегистрированные вещества с опытом совместного применения: Если комбинация веществ уже применялась в мировой клинической практике и зарегистрирована, исследования безопасности на животных, как правило, не проводятся. Требуется лишь обоснование отсутствия фармакокинетических взаимодействий.
2. Зарегистрированные вещества без опыта совместного применения: Следует рассмотреть ожидаемые взаимодействия. При необходимости проводятся доклинические исследования фармакокинетических взаимодействий и токсикологические исследования комбинации (связующие исследования).
3. Новые действующие вещества в комбинации: Требуется выполнение полной или расширенной программы доклинической разработки. Если полная программа выполнена для отдельных компонентов, для обоснования клинических исследований комбинации требуется проведение доклинического токсикологического исследования продолжительностью, эквивалентной клиническому исследованию, но не более 90 дней.

Согласно поправке № 143, для одобрения регистрации комбинированного препарата необходимо представление результатов 90-дневного токсикологического исследования, однако для кратковременного клинического применения допускается представление результатов исследований меньшей продолжительности.

Важно обосновать вклад каждого действующего вещества в общую эффективность и безопасность. Комбинированные препараты не должны создаваться для лечения невзаимосвязанных заболеваний без терапевтического обоснования.

Требования GLP к организации исследований

Надлежащая лабораторная практика (GLP) является обязательным требованием для доклинических исследований безопасности, результаты которых представляются в регуляторные органы. Решение Совета ЕЭК от 03.11.2016 № 81 утверждает Правила GLP ЕАЭС, гармонизированные с принципами ОЭСР.

Основные требования GLP:

1. Система обеспечения качества (СОК): Испытательная лаборатория должна иметь независимое подразделение СОК, которое контролирует соблюдение правил, проводит инспекции исследований и аудиты данных.
2. Персонал: Руководитель исследования несет полную ответственность за проведение исследования и отчет. Весь персонал должен быть квалифицирован и обучен.
3. Помещения и оборудование: Должны быть подходящими для проводимых исследований, обеспечивать разделение различных видов деятельности для предотвращения перекрестного загрязнения. Оборудование должно проходить калибровку и обслуживание.
4. План исследования: Перед началом исследования должен быть утвержден план, содержащий цели, методы, процедуры и организацию. Любые изменения в плане должны быть документально оформлены.
5. Отчетность: Заключительный отчет должен точно отражать первичные данные и быть подписан руководителем исследования. СОК предоставляет заключение о соответствии исследования правилам GLP.
6. Архивирование: Первичные данные, планы, отчеты и образцы должны храниться в архиве в течение установленного срока (не менее 5 лет после окончания обращения препарата, если иное не установлено законодательством).

Несоблюдение GLP может привести к признанию данных недействительными. Однако для некоторых видов исследований (например, первичная фармакодинамика, некоторые исследования in vitro) отклонение от GLP допускается при надлежащем обосновании и обеспечении качества данных, как указано в Рекомендации Коллегии ЕЭК от 27.10.2020 № 18.

Продолжительность исследований и связь с клиническими фазами

Одним из ключевых требований является соответствие продолжительности доклинических исследований продолжительности клинических. Это обеспечивает безопасность участников клинических испытаний. Ниже приведены таблицы, основанные на Приложениях № 2 и № 3 к Решению Коллегии ЕЭК от 26.11.2019 № 202.

Таблица 1. Минимальная продолжительность доклинических исследований токсичности при повторном введении для обоснования проведения клинических исследований

Примечание: Клинические исследования продолжительностью более 3 месяцев разрешается начинать при наличии результатов 3-месячного исследования на грызунах и негрызунах при условии представления обоснования и полных результатов до превышения 3-месячного дозирования у человека.

Таблица 2. Минимальная продолжительность доклинических исследований токсичности при повторном введении для обоснования регистрации препарата

Примечание: Исследования 6-месячной продолжительности на негрызунах считаются достаточными в ряде случаев (иммуногенность, краткосрочная экспозиция при хронических заболеваниях, короткая ожидаемая продолжительность жизни пациентов).

Эти требования являются обязательными. Отклонения возможны только для препаратов, предназначенных для лечения жизнеугрожающих заболеваний, не имеющих эффективной терапии, при индивидуальном подходе и согласовании с уполномоченным органом.

Практическое применение и типичные ошибки

При планировании доклинической программы заявители часто сталкиваются с рядом проблем, которые могут замедлить процесс регистрации.

Типичные ошибки:

1. Недостаточная экспозиция у животных: Выбор доз, не обеспечивающих достаточного превышения клинической экспозиции, что не позволяет оценить запас безопасности.
2. Нарушение принципов GLP: Проведение ключевых токсикологических исследований без соблюдения GLP без надлежащего обоснования.
3. Неучет метаболитов: Игнорирование необходимости токсикологической оценки метаболитов, образующихся у человека в значительных количествах.
4. Некорректная оценка примесей: Отсутствие оценки мутагенного потенциала примесей согласно Рекомендации № 23, особенно при изменениях в процессе производства.
5. Недостаточное обоснование для комбинаций: Попытка зарегистрировать комбинированный препарат без предоставления данных о взаимодействии компонентов, если опыт совместного применения отсутствует.

Для минимизации рисков рекомендуется проводить научные консультации с уполномоченными органами государств-членов на ранних этапах разработки. Это позволяет согласовать объем исследований и избежать ненужных затрат. Также важно регулярно мониторить обновления нормативной базы, так как требования ЕАЭС продолжают гармонизироваться с международными стандартами (ICH, OECD).

Заключение

Доклинические исследования безопасности являются неотъемлемой частью процесса разработки лекарственных препаратов в ЕАЭС. Строгое соблюдение требований Решения Коллегии ЕЭК от 26.11.2019 № 202 и Правил GLP (Решение Совета ЕЭК от 03.11.2016 № 81) гарантирует защиту участников клинических исследований и пациентов, получающих зарегистрированные препараты.

Использование рекомендательных документов (Рекомендации № 10, № 18, № 23, № 25, № 33) позволяет оптимизировать программу исследований, применяя современные научные подходы и сокращая использование животных там, где это возможно без ущерба для безопасности. Особое внимание следует уделять оценке мутагенных примесей, токсикокинетике и специфике комбинированных препаратов, так как эти области часто становятся предметом дополнительных вопросов экспертов.

Успешное прохождение этапа доклинической разработки закладывает основу для получения разрешения на клинические исследования и последующей регистрации. Заявителям рекомендуется комплексно подходить к планированию программы, учитывая взаимосвязь доклинических данных с требованиями к качеству, клиническим исследованиям и производству. Для детального изучения смежных вопросов рекомендуется обратиться к статьям серии:

• Терминология и нормативная база ЕАЭС в сфере обращения лекарственных средств
• Клинические исследования и биоэквивалентность в ЕАЭС
• Требования к качеству лекарственного препарата и нормативный документ по качеству
• Надлежащая производственная практика (GMP) и инспекции в ЕАЭС
• Подготовка регистрационного досье по правилам ЕАЭС
• Специфические требования для отдельных категорий лекарственных препаратов

Инвестиции в качественную доклиническую разработку на ранних этапах существенно снижают регуляторные риски и ускоряют вывод безопасных и эффективных лекарственных препаратов на рынок Евразийского экономического союза.